动物营养学报

2020, v.32(07) 3333-3342

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植物乳杆菌DPP8胆盐水解酶基因在大肠杆菌中的表达及其酶学性质
Expression of Bile Salt Hydrolase Gene from Lactobacillus plantarum DPP8 in Escherichia coli and Its Enzymatic Properties

丁轲;段锦;余祖华;李旺;李元晓;何万领;张春杰;丁盼盼;王玉琴;刘宁;

摘要(Abstract):

本试验旨在克隆植物乳杆菌DPP8胆盐水解酶(BSH)基因并在大肠杆菌表达系统对其进行表达,同时探讨其酶学性质。通过PCR技术克隆植物乳杆菌DPP8 BSH基因,然后将该基因重组到大肠杆菌表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a(+)-BSH,再将其转化至大肠杆菌BL21中,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达BSH。采用牛磺酸标准液标定法对表达的BSH的活性进行测定,并对其酶学性质进行研究。结果显示:本试验获得了BSH基因全长975 bp的序列,同源性比较和系统进化树分析表明成功获得了BSH基因。对BSH表达产物的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示获得了1条约为56 ku的蛋白条带,与预期蛋白分子质量大小相符。重组菌株在37℃、0.1 mmol/L IPTG诱导6 h时BSH活性最高,可达22.81 U/mL。纯化的BSH的最适反应温度为37℃,最适反应pH为6.5,在40℃以下时具有较好的热稳定性,pH在3.0~9.0时可保持90%以上的活性。镁离子(Mg~(2+))、铝离子(Al~(3+))、三价铁离子(Fe~(3+))对BSH活性具有较强的抑制作用,而钠离子(Na~+)、钾离子(K~+)、二价铁离子(Fe~(2+))、铜离子(Cu~(2+))、锰离子(Mn~(2+))、锌离子(Zn~(2+))、钙离子(Ca~(2+))对BSH活性无明显抑制作用。综上,本试验成功表达了植物乳杆菌DPP8 BSH,且其活性可达22.81 U/mL,在40℃以下和pH 3.0~9.0时能够保持较强的活性,但Mg~(2+)、Al~(3+)和Fe~(3+)对其活性具有较强的抑制作用。

关键词(KeyWords): 植物乳杆菌;胆盐水解酶;克隆;表达;酶学性质

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 河南省自然科学基金项目(182300410052);; 河南省科技攻关项目(182102110184)

作者(Author): 丁轲;段锦;余祖华;李旺;李元晓;何万领;张春杰;丁盼盼;王玉琴;刘宁;

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DOI:

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